一、概述

內(nèi)標(biāo)法在氣相色譜?定量分析中是一種重要的技術(shù)。使用內(nèi)標(biāo)法時(shí)，在樣品中加入一定量的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，它可被色譜柱所分離，又不受試樣中其它組分峰的干擾。

二、內(nèi)標(biāo)法的概念和內(nèi)標(biāo)物的選擇

什么叫內(nèi)標(biāo)法?如何選擇內(nèi)標(biāo)物?

內(nèi)標(biāo)法就是選擇適當(dāng)?shù)奈镔|(zhì)作為內(nèi)標(biāo)物質(zhì)，定量加入被測(cè)樣品中，根據(jù)被測(cè)組分和內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的峰面積之比，乘以校正因子，對(duì)應(yīng)內(nèi)標(biāo)物質(zhì)加入量所進(jìn)行的含量測(cè)定方法。

※優(yōu)點(diǎn)：色譜條件對(duì)結(jié)果影響不大，準(zhǔn)確度、精度較高；

※缺點(diǎn)：選擇合適的內(nèi)標(biāo)物質(zhì)比較困難；

內(nèi)標(biāo)法是一種間接或相對(duì)準(zhǔn)確的校準(zhǔn)方法；在分析測(cè)定樣品中某組分含量時(shí)，加入一種內(nèi)標(biāo)物質(zhì)以校準(zhǔn)和消除出于操作條件的波動(dòng)而對(duì)分析結(jié)果產(chǎn)生的影響，以提高分析結(jié)果的準(zhǔn)確度。

使用內(nèi)標(biāo)法時(shí)，在樣品中加入一定量的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，它可被色譜拄分離，又不受試樣中其它組分峰的干擾，只要測(cè)定內(nèi)標(biāo)物和待測(cè)組分的峰面積與相對(duì)響應(yīng)值，即可求出待測(cè)組分在樣品中的百分含量。

采用內(nèi)標(biāo)法定量時(shí)，內(nèi)標(biāo)物的選擇是一項(xiàng)十分重要的工作。理想地說(shuō)，內(nèi)標(biāo)物應(yīng)當(dāng)是一種能得到純樣的己知化合物，這樣它能以準(zhǔn)確、已知的量加到樣品中去，它應(yīng)當(dāng)和被分析的樣品組分有基本相同或盡可能一致的物理化學(xué)性質(zhì)(如，化學(xué)結(jié)構(gòu)、極性、揮發(fā)度及在溶劑中的溶解度等)、色譜行為和響應(yīng)特征，最好是被分析物質(zhì)的同系物。

當(dāng)然，在色譜分析條件下，內(nèi)標(biāo)物必須能與樣品各組分充分分離。需要指出的是，在少數(shù)情況下，分析人員可能比較關(guān)心化合物在一個(gè)復(fù)雜過(guò)程中所得到的回收率，此時(shí)，他可以使用一種在這種過(guò)程中很容易被完全回收的化臺(tái)物作內(nèi)標(biāo)，來(lái)測(cè)定感興趣化合物的百分回收率，而不必遵循以上所說(shuō)的選擇原則。

三、影響內(nèi)標(biāo)法定量分析的因素

在使用內(nèi)標(biāo)法進(jìn)行定量時(shí)，有哪些因素會(huì)影響內(nèi)標(biāo)和被測(cè)組分的峰高或峰面積比值?

影響內(nèi)標(biāo)和被測(cè)組分峰高或峰面積比值的因素主要有化學(xué)方面、色譜方面和儀器方面三類；

由化學(xué)方面的原因產(chǎn)生的面積比的變化常常在分析重復(fù)樣品時(shí)出現(xiàn)，化學(xué)方面的因素包括：

1、內(nèi)標(biāo)物在樣品里混合不好；

2、內(nèi)標(biāo)物和樣品組分之間發(fā)生反應(yīng)；

3、內(nèi)標(biāo)物純度可變等；

對(duì)于較成熟方法來(lái)說(shuō)，色譜方面問(wèn)題發(fā)生的可能性更大，色譜上常見(jiàn)的問(wèn)題（如：滲漏）對(duì)絕對(duì)面積的影響較大，對(duì)面積比的影響小一些，但如果絕對(duì)面積的變化已大到足以使面積比發(fā)生顯著變化的程度，那么一定有某個(gè)重要的色譜問(wèn)題存在，如，進(jìn)樣量改變太大，樣品組分濃度和內(nèi)標(biāo)濃度之間有很大差別，檢測(cè)器非線性等。進(jìn)樣量應(yīng)足夠小并保持不變，這樣才不致于造成檢測(cè)器和積分裝置飽和。如果認(rèn)為方法較可靠，而色譜圖看起來(lái)也是正常的話，應(yīng)著重檢查積分裝置和設(shè)置、斜率和峰寬定位。對(duì)積分裝置發(fā)生懷疑的最有力的證據(jù)是：面積比可變，而峰高比保持相對(duì)恒定，

四、制作內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)曲線注意事項(xiàng)

   在制作內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí)應(yīng)注意什么?  

   在用內(nèi)標(biāo)法做色譜定量分析時(shí)，先配制一定重量比的被測(cè)組分和內(nèi)標(biāo)樣品的混合物做色譜分析，測(cè)量峰面積，做重量比和面積比的關(guān)系曲線，此曲線即為標(biāo)準(zhǔn)曲線。在實(shí)際樣品分析時(shí)所采用的色譜條件應(yīng)盡可能與制作標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí)所用的條件一致，因此，在制作標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí)，不僅要注明色譜條件（如，固定相、柱溫、載氣流速等），還應(yīng)注明進(jìn)樣體積和內(nèi)標(biāo)物濃度。

在制作內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí)，各點(diǎn)并不完全落在直線上，此時(shí)應(yīng)求出面積比和重量比的比值與其平均位的標(biāo)準(zhǔn)偏差，在使用過(guò)程中應(yīng)定期進(jìn)行單點(diǎn)校正，若所得值與平均值的偏差小于2，曲線仍可使用，若大于2，則應(yīng)重作曲線，如果曲線在較短時(shí)期內(nèi)即產(chǎn)生變動(dòng)，則不宜使用內(nèi)標(biāo)法定量。

（內(nèi)容參考實(shí)驗(yàn)與分析網(wǎng)）