以棱光F95S熒光分光光度計為例，說明使用標準曲線法對樣品定量的具體步驟。

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1、按下儀器總電源開關。

2、主機預熱 30 分鐘。

3、準備樣品

熒光樣品池一盛蒸餾水或去離子水作參比（或試劑空白、參比溶液）。再取已知含量的標準樣品，按規(guī)范流程配置系列標準溶液，如按濃度從低到高標 A、B、C、D等。然后把這些配置好的標準溶液中濃度最高的標準溶液注入樣品池二中。

4、旋轉“波長”調節(jié)旋鈕，至標準樣品熒光發(fā)射光譜峰值波長處。

5、按“模式”選擇鍵，進入主菜單界面，選擇執(zhí)行“熒光值”測定功能。

6、靈敏度設定

打開樣品室蓋，樣品池二置入樣品座上，合上樣品室蓋。然后按“歸一”調整鍵，調節(jié)至LCD液晶顯示窗顯示熒光值顯示在 10-100 左右之間，記下此時的靈敏度檔位。

7、調零

打開樣品室蓋，樣品池一置入樣品座上，合上樣品室蓋。然后按“調零”調整鍵，儀器自動調整0%，至LCD液晶顯示窗顯示0.0±0.1%止。如發(fā)現(xiàn)0%有漂移，繼續(xù)按下調零調整鍵，直至LCD液晶顯示窗顯示 0.0±0.1%為止。

8、放入標準樣品

打開樣品室蓋，取出樣品池一，然后倒掉樣品池二中的溶液，清洗干凈后注入配置好的標準樣品A，然后將樣品池二置入樣品室內的樣品座，合上樣品室蓋。

9、讀數(shù)

等數(shù)值穩(wěn)定下來之后顯示的數(shù)值就是該待測樣品的熒光值，由LCD液晶顯示窗讀出儀器測得的樣品熒光值，并記錄。

10、重復執(zhí)行上述8、9步驟，逐個記錄B、C、D等每個標樣的熒光值。

11、取待測樣品

取待測濃度樣品，經(jīng)稀釋搖勻，注入用蒸餾水或去離子水洗滌后的熒光樣品池二。

12、放入待測樣品并讀數(shù)

打開樣品室蓋，將裝有待測樣品樣品池二置入樣品座上，合上樣品室蓋。待LCD液晶顯示窗顯示的數(shù)值穩(wěn)定下來之后讀出儀器測得的待測樣品熒光值，并做記錄。

13、制作標準曲線

取坐標紙，以 X 軸為濃度坐標(范圍：0～試樣最大濃度值)，以 Y 軸為熒光值坐標(范圍：0～測量的最大熒光值)。按測量誤差要求取軸上的值。在圖上找出各個對應標準溶液濃度和相應熒光值的坐標點，并用一直線通過四個坐標點，或使坐標點均勻分布在直線兩邊，并使點到直線間的距離最小。

建議進行本操作時購買棱光通用數(shù)據(jù)處理軟件包，可自動繪制標準曲線，方便對數(shù)據(jù)進行計算、操作，同時也節(jié)省操作時間。

14、獲取待測樣品的濃度

由標準曲線表Y軸熒光值坐標定位待測樣品濃度值位置，獲得標準曲線表X軸濃度坐標相應點的濃度值。

15、繼續(xù)測定其它樣品，或關閉儀器總電源開關。